Tha grunn stains eadar-dhealaichte a ghabhas cleachdadh airson lèirsinn agus dealbh a dhèanamh de DNA an dèidh dhan stuth a bhith air a sgaradh le electrophoresis gel. Am measg nan iomadh roghainn, is e na còig seòrsa seo a 'tòiseachadh as cumanta le Ethidium bromide, is e seo am fear as motha a chleachdar. Nuair a bhios tu ag obair leis a 'phròiseas seo, tha e cudromach chan e a-mhàin gu bheil fios againn air na h-eadar-dhealachaidhean eadar na gnèithean ach na cunnartan slàinte a th' ann.
01 Ethidium Bromide
Is e coltas a th 'ann an ethidium bromide an dath as ainmeile a thathas a' cleachdadh airson sealladh a dhèanamh air DNA. Faodar an dath seo a chleachdadh anns a 'mheasgachadh gel, anns a' bhufair electrophoresis no gus an gel a ghoil às deidh a ruith. Bidh moilecules den dath a 'cumail ri sreathan DNA agus fluoresce fo sholas UV, a' sealltainn dhut gu dìreach far a bheil na còmhlan taobh a-staigh an gel. A dh 'aindeoin a bhuannachd, is e an rud as ìsle gur e bromide ethidium a th' ann an carcinogen, agus mar sin feumar a làimhseachadh le cùram mòr. Air sgàth nan cunnartan slàinte a dh'fhaodadh a bhith ann a bhith ag obair leis an gèilleadh seo, lorgar roghainnean eile. 02 Òr SYBR
Faodar dath Gold SYBR a chleachdadh airson dNA dùbailte no singilte a chumail, no airson RNA a chumail. B 'e Gold SYBR aon de na ciad roghainnean eile a thaobh bromide ethidium gus a' mhargaidh a bhualadh agus thathas den bheachd gu bheil e nas mothachaile na bromide ethidium. Tha an dath a 'taisbeanadh fuaim-fhuarasachd 1000-uaislean nas motha UV nuair a tha e ceangailte ri aigéid nècigeach. Bidh e an uairsin a 'toirt buaidh air a' cheudad tioram agus àrd a 'gèilleadh geallan agus faodar a chleachdadh ann an geallaichean formaldehyde. A chionn 's gu bheil fuaim-fhuaimneachadh a' mholacail a tha gun chuairt cho ìosal, chan eil feum air faighinn a-mach. Tha ceadachas Molecular Probes cuideachd (bho chaidh SYBR Gold a chur air bhog) a 'leasachadh agus margaidheachd SYBR Safe agus SYBR Green a tha nas sàbhailte seach bromide ethidium.
03 SYBR Green
Tha an SYBR Uaine I agus II a 'giùlan (a-rithist, air am margaidheachd le Dearbhaidhean Molecular) nas fheàrr airson diofar adhbharan. A chionn 's gu bheil iad a' ceangal ri DNA, tha iad fhathast air am meas mar dhaoine a dh'fhaodadh a bhith an sàs ann agus air sgàth sin, bu chòir dhaibh a bhith air an làimhseachadh le cùram. Tha SYBR Green I nas mothachaile airson a chleachdadh le DNA dùbailte, fhad 'sa tha SYBR Green II, air an làimh eile, as fheàrr airson a chleachdadh le DNA no RNA singilte. Coltach ris an 'Ethidium Bromide' a tha a 'còrdadh ris, tha na stuaranan seo mothachail air fluoresce fo solas UV. 04 SYBR Sàbhailte
Chaidh SYBR Safe a dhealbhadh airson a bhith na àite nas sàbhailte air sgàth Ethidium Bromide agus stains SYBR eile. Chan eilear den bheachd gur e sgudal cunnartach a th 'ann agus mar as trice gabhaidh e a thoirt air falbh tro na siostaman sealaidh àbhaisteach (me sìos an drain), seach gu bheil deuchainn thinneasachd a' sealltainn nach eil truailleadh gann ann. Tha deuchainn cuideachd a 'sealltainn gu bheil mòran no ginealachd sam bith ann air ceallan Embryo Hamster Syrian (SHE), lymphocyte daonna, ceallan lymphoma luchag, agus anns an deuchainn AMES. Faodar an stain a chleachdadh le transilluminator solais gorm a tha ag adhbharachadh cron air an DNA a bhith air a dhealbhadh agus a 'toirt seachad èifeachdas nas fheàrr airson cluain nas fhaide air adhart. 05 Eva Green
Is e dathan flùraiseach uaine a th 'ann an Eva Green a chaidh a lorg gus bacadh a chur air PCR gu ìre nas lugha na dathan eile. Tha seo ga dhèanamh glè fheumail airson tagraidhean mar PCR cuimseach ann an àm fìor. Tha e cuideachd na dheagh roghainn ma tha thu a 'cleachdadh gèinean aig a' leaghadh ìseal airson dNA fhaighinn. Tha e gu math seasmhach aig teòthachd àrd agus tha fuaim-fhuaimneachd gu math ìosal leis fhèin, ach tha e gu math follaiseach nuair a tha DNA a 'dol. Tha Eva Green cuideachd air a dhearbhadh gu bheil e gu math ìosal no nach eil co-thoirmeasg no neo-ghluasadachd.