Mar a nì thu an t-inneal-slataidh immunohistochemical seo
Is e fuasgladh bufair a th 'ann an saline buffered buffered (PBS) a tha gu cumanta air a chleachdadh airson staining immunohistochemical (IHC) agus tha e air a chleachdadh gu tric ann an rannsachadh bith-eòlasach. Is e fuasgladh salainn stèidhichte air uisge a th 'ann am PBS anns a bheil sodium hydrogen phosphate, sodium chloride agus, ann an cuid de chùisean, clorid potaisium agus potassium dihydrogen phosphate.
Sèiding immunohistochemical
Tha immunohistochemistry a 'toirt iomradh air a' phròiseas a bhith a 'lorg antigens mar phrotainnean ann an ceallan earrann fiodha le bhith a' cleachdadh prionnsapal antibodies a tha a 'ceangal gu sònraichte ri antigens ann am figheagan bith-eòlasach.
B 'e staining immunofluorescent a' chiad dòigh staining immunohistochemical.
Bidh na h-oganaich a 'fàs follaiseach nuair a tha iad air an luachadh le antibodies a' cleachdadh dathan fuaim-fhuaim mar thoradh air freagairt a tha ceangailte ri antigen-antibody. Tha am pròiseas seo a 'tachairt nuair a tha e air a chur an gnìomh le solas inntinneach de dh' fhad sònraichte fo mhicrosgop flùrasach.
Tha na co-chruinneachaidhean osmolarity agus ion de na fuasglaidhean a 'freagairt ri feadhainn a' chorp daonna -s'ot isotonic.
Rèit airson PBS
Faodaidh tu PBS ullachadh ann an grunn dhòighean. Tha iomadh foirmle ann. Chan eil potassium ann an cuid dhiubh, ged a tha calcium no magnesium ann an cuid eile.
Tha an reasabaidh seo gu math furasta. Tha e airson fuasgladh stoc 10X PBS (0.1M). Ach, faodaidh tu cuideachd fuasgladh stoc 1X a dhèanamh, no tòiseachadh leis an reas 10X seo agus ga thrioblachadh gu 1X.
Bidh am pròiseas gu lèir a 'toirt mu 10 mionaid.
Tha roghainn airson Tween a chur ri fhaighinn cuideachd.
Na dh'fheumas tu a 'dèanamh bufair PBS
- Fòfat siodium monobasic (anhydrous)
- Sodium phosphate dibasic (anhydrous)
- Chloride sodium
- Bàtaichean sgèile agus cuideam
- Stir stir magnetach agus bàr gluasad
- Dearbhadh pH a tha air a calibrated agus fuasglaidhean iomchaidh airson pH atharrachadh
- 1L bhlais mholaimiteach
- Tween 20 (roghainneil)
Mar a nì thu fàileadh làn fosfat buidhe (PBS)
Cuir cuideam air 10.9g de phlasfat sodium anhydraideach (Na2HPO4), 3.2g de phlòfat sodium anhydrach (NaH2PO4), agus 90g clorid sodium (NaCl).
Fuasgladh ann an uisge fo uisge 1L.
Dèan an pH gu 7.4 agus cuir am fuasgladh suas gu tomhas deireannach de 1L.
Dilute 10X mus cleachd thu agus pong nas urrainn dhut ma tha sin riatanach.
Faodaidh tu fuasgladh PBS a dhèanamh anns a bheil 0.5% Tween 20 le bhith a 'cur 5mL Tween 20 gu fuasgladh 1L.
Beachdan airson a bhith a 'dèanamh PBS Buffer
Stèidhich am bufair aig teòthachd an t-seòmair an dèidh dhut fuasgladh PBS a dhèanamh.
Faodar ath-bheothaichean neo-mhothachail a thoirt a-steach ach feumaidh tu ath-àireamhachadh a dhèanamh air a 'mhisneachd iomchaidh aca airson na molecolailean uisge a bharrachd a ghabhail.
Cleachdaidhean de shàileag le frasadair fosgaichte (PBS)
Tha mòran de chleachdaidhean saillte saillte le fosfat air sgàth 's gu bheil e isotonaigeach agus neo-thioblaideach don chuid as motha de cheallan. Faodar a chleachdadh airson stuthan a thiormachadh agus bidh e air a chleachdadh gu tric airson soithichean ceallan a losgadh. Faodar PBS a chleachdadh mar dhòigh-obrach ann an diofar dhòighean airson biomolecules a thiormachadh seach gu bheil na molecollan uisge a tha taobh a-staigh na buidhne air an structar timcheall air a 'phròtain-stuthan, mar eisimpleir. Bidh e "air a thiormachadh" agus air a ghluasad gu uachdar cruaidh.
Tha am pH fhathast seasmhach agus cunbhalach gus casg a chur air sgrios cheallan.
Bidh am film tana uisge a tha a 'ceangal ris an stuth a' cur casg air neo-shuidheachadh no atharrachaidhean co-obrachail eile. Faodar bufairean carbonate a chleachdadh airson an aon adhbhar ach le nas èifeachdaiche.
Faodar PBS a chleachdadh cuideachd gus speactram fiosrachaidh a ghabhail nuair a tha thu a 'tomhas an glacadh pròtain ann an ellipsometry.