Tha am bufair seo air a chleachdadh airson sgaradh electrophoresis de DNA
Tha TBE bufair gu h-àraidh feumail airson sgaradh de dhuilleagan DNA nas lugha (MW <1000), leithid stuthan beaga de chìsean einnsein cuingealachaidh .
Tha comas buannachaidh nas motha aig TBE agus bheir e rùn nas mionaidiche na TAE bufair . Is e fuasgladh a th 'ann an TAE bufair fuasgladh de stèidh Tris, aigéad searbhiteach agus EDTA (Tris-acetate-EDTA).
Tha TBE sa chumantas nas daoire na TAE agus a 'bacadh DNA ligase, a dh' fhaodadh duilgheadasan adhbhrachadh ma thathar an dùil ceumannan purachaidh DNA agus ligation an dèidh sin. Le na trì ceuman sìmplidh a leanas, ionnsaich mar a nì thu bufair TBE. Cha bu chòir dha barrachd air mu 30 mionaid a ghabhail gus am bufair seo a chruthachadh. Seo mar a tha:
Ullaich rèiteachadh stoc de EDTA
Bu chòir fuasgladh EDTA (ethylenediamine tetraacetic acid) a bhith ullamh ron àm. Cha tèid EDTA gu tur a-steach gu fuasgladh gus an tèid am pH atharrachadh gu mu 8.0. Airson fuasgladh stoc 500-mililiter de 0.5 M EDTA, cuir cuideam air 93.05 gram de salann dìosail EDTA (FW = 372.2). An uairsin ga thoirmeasg ann an 400 mililiters uisge a tha air a dheisealachadh agus atharraich am pH le NaOH. Às dèidh sin, cuir suas am fuasgladh gu tomhas deiridh de 500 mililiters.
Ullaich fuasgladh stoc bho TBE
Dèan fuasgladh stoc dùmhach (5x) de TBE le 54 g Tris base (FW = 121.14) agus 27.5 g aigéad boric (FW = 61.83) agus a 'sgaoileadh an dà chuid ann an timcheall air 900 milliliters de uisge le deionized. An uairsin cuir 20 millilitar de 0.5 M EDTA (pH 8.0) agus atharraich am fuasgladh gu tomhas de 1 liotair deireannach.
Faodar am fuasgladh seo a stòradh aig teòthachd an t-seòmair ach bidh teisteanas ann an fuasglaidhean nas sine. Stèidhich am bufair ann am botail glainne agus cuir às dha ma tha rùsg air a chruthachadh.
Ullaich Fuasgladh Obrach de TBE
Airson electrophoresis gel agarose, faodar bufair TBE a chleachdadh aig cuibhreann de 0.5x (1:10 de thrioblaid cruaidh). Dèan fuasgladh air an stoc le 10x ann an uisge air a thionndadh. Is e co-chruinneachaidhean sòla deireannach 45 mM Tris-borate agus 1 EDM mM. Tha am bufair a-nis deiseil airson a chleachdadh ann a bhith a 'ruith gel agarose .
Na tha a dhìth oirbh
Gus TBE bufair a dhèanamh, feumaidh tu dìreach ceithir stuthan. Is e na h-innealan a tha air fhàgail air an liosta seo uidheamachd. Is iad na ceithir stuthan a tha a dhìth a bhith a 'dèanamh salann disodium EDTA, ionad Tris, searbhag bòrrach agus uisge deionized.
A thaobh uidheamachd, feumaidh tu meatair pH agus ìrean calibration, mar a bhios iomchaidh. A bharrachd air sin, bidh feum agad air beicearan no flasgan 600-mililiter agus 1500-mililiter. Le bhith a 'cur a-mach feumalachdan na h-uidheam agad, tha iad a' ceumnachadh siolandairean agus a 'gluasad bhàraichean agus a' gluasad phlàraichean.
Thoir sùil air an liosta-obrach aig an leabhran a bhios thu a 'cleachdadh gus dèanamh cinnteach gu bheil a h-uile dad a dh' fheumas tu mus tòisich thu. Chan eil dad nas miosa na bhith a 'stad ann am meadhan a bhith ag ullachadh fuasgladh oir tha thu air falbh às na stuthan ceart.
Ma tha an liosg agad san sgoil no air an làrach-obrach agad, dèan cinnteach gu bheil an luchd-obrach ceart agad gus faicinn gu bheil na nithean uile aca anns an stoc. Le bhith a 'dèanamh sin, faodaidh seo ùine a shàbhaladh dhut agus lùths aig an deireadh.