Mar a tha na crìochan-luirg sin a 'seasamh a-mach
Dè an t-eòlas a th 'agad air enzyman cuingealachaidh? Faigh tuigse nas fheàrr air na tha iad a 'dèanamh agus carson a tha iad cudromach, leis an sgrùdadh seo.
Sgaoileadh cuingealachaidh a mhìneachadh
Is e clas de einnsein a th 'ann an endonucleases cuingealachaidh a tha a' gearradh mholacilean DNA. Tha gach einnse ag aithneachadh sreath àraid de nucleotidean anns an sreathan DNA. Mar as trice tha na h-earrannan sin timcheall air 4 gu 6 bun-chàraidean fada. Tha na sreathan pailtromic anns a bheil an sreathan DNA co-phàirteach aig an aon sreath a-mhàin air an taobh eile.
Ann am faclan eile, tha an dà shreath de DNA air an gearradh aig an aon làrach.
Far an lorgar na h-einnseanan seo
Gheibhear sgaoilidhean cuingealachaidh ann an iomadh seòrsa de lobhag far a bheil an dleastanas bith-eòlais aca pàirt a ghabhail ann an dìon cill. Tha na h-enzyman "a 'cuingealachadh" DNA cèin (me viral) a thig a-steach don chill, le bhith ga mhilleadh. Tha siostam atharrachaidh srianachaidh aig a 'chill aoigheachd a tha a' cnuasachadh a DNA fhèin aig làraich a tha sònraichte airson a h-einnseanan cuingeachaidh fa leth, agus mar sin ga dhìon bho cleavage. Chaidh còrr is 800 enzyman aithnichte a lorg a tha ag aithneachadh barrachd air 100 diofar shreathan nucleotide.
Cleachd ann am bith-theicneòlas
Thathar a 'cleachdadh cuingealachaidhean ann an bith-theicneòlas airson gearradh DNA a-steach ann an sreathan nas lugha gus a bhith a' sgrùdadh eadar-dhealachaidhean fad criomagan am measg dhaoine (Meudachadh Fragment Length Polymorphism - RFLP). Bidh iad cuideachd air an cleachdadh airson clonadh gine.
Chaidh dòighean-obrach RFLP a chleachdadh gus dearbhadh gu bheil eadar-dhealachaidhean sònraichte aig daoine fa leth no buidhnean de dhaoine ann an sreathan gine agus pàtrain sgaoilidh cuingealachaidh ann an cuid de raointean den genome.
Is e eòlas air na raointean sònraichte seo bunait airson meur-lorg DNA . Tha gach aon de na dòighean sin an urra ri bhith a 'cleachdadh electrophoresis gel agarose airson sgaradh de na pìosan DNA. Tha TBE buffer, a tha air a dhèanamh suas de bhonn Tris, aigéad bòrrach, agus EDTA, air a chleachdadh gu cumanta airson electrophoresis gel agarose gus sgrùdadh a dhèanamh air stuthan DNA.
Seòrsaichean de dh 'einnseanan cuingealachaidh
Tha trì seòrsaichean de shiostaman cuingealachaidh ann. Bidh seòrsa I a 'gearradh DNA ann an àiteachan air thuaiream cho fada ri 1000 no barrachd pàighrichean bunaiteach bhon làrach aithne. Gearraidhean Type III aig mu 25 paidhir bunaiteach bhon làrach. Feumaidh seòrsan I agus III ATP agus faodaidh iad a bhith nan einnsean mòra le iomadh fo-aonadan. Tha einnseanan Type II, a tha gu ìre mhòr air an cleachdadh ann an bith-theicneòlas, gearradh DNA taobh a-staigh an sreath aithnichte gun fheum air ATP agus tha iad nas lugha agus nas sìmplidhe.
Tha enzyman cuingealachaidh Type II air an ainmeachadh a rèir nan gnèithean bacteria bhon a tha iad iomallach. Mar eisimpleir, bha an enzyme EcoRI air leth bho E. coli . Tha a 'mhòr-chuid den phoball eòlach air briseadh E. coli ann am biadh.
Faodaidh einnseanan cuingealachaidh Type II dà sheòrsa de ghearraidhean a chruthachadh a rèir a bheil iad a 'gearradh an dà shreath aig meadhan an t-sreath aithneachaidh no gach sreathan nas fhaisge air aon cheann den òrd aithneachadh.
Bidh an gearradh a bh 'ann mar-thà a' gineadh "cinnidhean bochda" gun a bhith a 'dol thairis air na nucleotide. Bidh an ceann mu dheireadh a 'cruthachadh cinn "sgeadach" no "co-fhillte" oir tha gach criomag de DNA mar thoradh air sin a tha a' moladh nan earrannan eile. Tha an dà chuid feumail ann an gintinneachd molecularach airson a bhith a 'dèanamh DNA agus protinidean ath-chuibhreachail .
Tha an fhoirm seo de DNA a 'seasamh a-mach oir tha e air a dhèanamh leis an ceangal (dà cheangal ri chèile) de dhà dhuilleag no barrachd eadar-dhealaichte nach robh ceangailte ri chèile an toiseach.