Is e clonadh gine an gnìomh a bhith a 'dèanamh lethbhreacan, no clones, de aon ghine. Aon uair 's gum bi gine air a chomharrachadh, faodar clones a chleachdadh ann an iomadh raon de rannsachadh bith-eòlasach agus gnìomhachais. Is e innleadaireachd ginteil a 'phròiseas a bhith a' clonadh ghinean gu fàs-bheairtean ùra no ag atharrachadh sreath DNA gus an toradh prothaid atharrachadh. Tha innleadaireachd ginteil an crochadh air ar comas air na modhan riatanach a leanas a choileanadh.
01 Ath-bheothachadh Sèidne Polymerase
02 Sgalan-cuingeachaidh
Tha lorg air einnseanan ris an canar endonucleases cuingealachaidh air a bhith riatanach do innleadaireachd phròtain . Bha na enzyman sin a 'gearradh DNA aig àiteachan sònraichte stèidhichte air an òrdachadh nucleotide. Tha na ceudan de dh ' einnseanan srian eadar-dhealaichte, a tha comasach air DNA a ghearradh aig làrach sònraichte, air a bhith air an iomall bho iomadh seòrsa bacteria. Tha DNA air a ghearradh le einnsear cuingealachaidh a 'dèanamh mòran de mhìrean nas lugha, de dhiofar mheudan. Faodar iad sin a dhealachadh le bhith a 'cleachdadh electrophoresis gel no cromatography.
03 Electrophoresis
Cha bhiodh DNA a dhìon bho chultar cealla, no ga ghearradh le bhith a 'cleachdadh einnseanan cuingealaichte mura b' urrainn dhuinn an DNA fhaicinn - is e sin, lorg dòigh gus am bi rud sam bith aig an earrainn agad no dè na meudan a tha agad ga ghearradh a-steach. Is e aon dhòigh air seo a dhèanamh le electrophoresis gel. Tha gèilean air an cleachdadh airson caochladh adhbharan, bho bhith a 'coimhead air DNA a ghearradh gus a bhith a' lorg a-steach dNA agus cur-a-steach DNA.
04 Thig còmhla ri Dà Phìos DNA
Ann an rannsachadh ginteil, gu tric tha e riatanach ceangal a dhèanamh air dà dhuilleag fa leth de DNA, gus sreathan ath-chuairteachadh a chruthachadh, no dùin cruinne a dhùnadh a chaidh a ghearradh le enzyman cuingealaichte. Faodaidh einnseanan ris an canar DNA ligases ceangal a dhèanamh eadar slabhraidhean nucleotide. Tha na h-einnseanan DNA polymerase I agus polynucleotide kinase cudromach cuideachd anns a 'phròiseas seo, airson beàrnan a lìonadh no na 5' crìochan a rèiteachadh, fa leth.
05 Taghadh de DNA Fèin-riochdachadh Beag
Canar plasmids ris na pìosan beaga de DNA cudthromach nach eil nam pàirt de genoma bacterial, ach a tha comasach air fèin-riochdachadh. Bidh plasmids gu tric air an cleachdadh mar fhactaran airson ginean a ghiùlan eadar meanbh-bheartan. Ann an bith-theicneòlas, aon uair 's gu bheil an gine de ùidh air a leudachadh agus an dà chuid gine agus plasmid air an gearradh le einnseanan cuingealachaidh, thèid an ceangal le chèile a' cruthachadh an dNA ris an canar DNA ath-leasaichte. Faodar DNA viral (bacteriophage) a chleachdadh cuideachd mar vectar, mar a ghabhas cosmids, plasmids ath-nuadhaichte a tha a 'toirt a-steach genes bacteriophage.
06 Dòigh gus gluasad a-steach a-steach do chòmhlan-còmhnaidh
Canar cruth-atharrachadh air a 'phròiseas a bhith a' gluasad stuth ginteil air vectar mar phlasmid, a-steach do cheallan ùra aoigheachd. Tha an dòigh seo a 'ciallachadh gu bheil na ceallan aoigheachd fosgailte do dh'atharrachadh àrainneachd a tha gan dèanamh "comasach" no rè ùine air an t-seic. Tha an dealanachadh mar aon dòigh mar sin. Is e am fear as motha am plasmid, an ìre as ìsle an èifeachdas leis a bheil e air a thoirt suas le ceallan. Tha roinnean DNA nas motha air an clonadh nas fhasa le bhith a 'cleachdadh bacteriophage, retrovirus no feactaran viral eile no cosmids ann an dòigh ris an canar transduction. Bidh feactaran Phage no viral gu tric air an cleachdadh ann an leigheas ath-nuadhachaidh ach faodaidh iad a bhith a 'cur a-steach DNA ann am pàirtean de na cromosoman far nach eil sinn ag iarraidh, ag adhbharachadh duilgheadasan agus eadhon aillse.
07 Dòighean airson Tagh-bheairtean Transgenic a thaghadh
Cha bhith a h-uile ceal a 'toirt suas DNA rè cruth-atharrachadh. Tha e deatamach gum bi dòigh ann a bhith a 'lorg an fheadhainn a nì. Gu h-àbhaisteach, faodaidh plasmids ginean a ghiùlan airson frith-dhìon antibiotic agus ceallan transgenic a thaghadh stèidhichte air mìneachadh nan ginean sin agus an comas a bhith a 'fàs air na meadhanan anns a bheil an antibiotic sin. Tha modhan taghaidh eile an crochadh air làthaireachd phrotainidean neach-aithris eile leithid an siostam x-gal / lacZ , no pròtain fluorescence uaine, a tha a 'ceadachadh taghadh stèidhichte air dath agus fluorescence, fa leth.