Air a leasachadh ann an 1983, tha am pròiseas PCR air a dhèanamh comasach gun dèanar rianachd DNA a choileanadh agus òrdugh nan nucleotides a chomharrachadh ann an ginean fa leth.
Bidh an dòigh a 'cleachdadh rothaireachd teirmeach no an teasachadh agus an fhuaim a th' ann a-rithist mun fhreagairt airson leaghadh agus ath-riochdachadh DNA. Mar a tha PCR a 'leantainn, tha an DNA "ùr" air a chleachdadh mar theamplaid airson ath-riochdachadh agus tha freagairt slabhraidh a' nochdadh, a 'leudachadh teamplaid DNA.
Tha dòighean-obrach PCR air an cur an gnìomh ann an iomadh raon de bhith-theicneòlas, a 'gabhail a-steach innleadaireachd phròtain , clonadh, forensics (meur-lorg DNA), deuchainnean tadhail, diagnosis galaran cinnidh agus / no gabhaltach, agus airson anailis de shamhlaichean àrainneachdail.
Ann am forensics, gu h-àraid, tha PCR gu h-àraid feumail oir tha e a 'meudachadh eadhon an àireamh as lugha de fhianais DNA. Faodar PCR a chleachdadh cuideachd airson mion-sgrùdadh a dhèanamh air DNA a tha na mìltean de bhliadhnaichean a dh'aois, agus chaidh na dòighean sin a chleachdadh gus a h-uile càil aithneachadh bho mamoth 800,000 bliadhna gu spioradan bho air feadh an t-saoghail.
Tha modh-obrach PCR mar a leanas:
- Tòiseachadh: Tha an ceum seo riatanach a-mhàin airson polymerases DNA a dh 'fheumas PCR tòiseachaidh teth. Tha an fhreagairt air a theasachadh eadar 94 agus 96 ° C agus thèid a chumail airson 1-9 mionaidean.
- Neo-èiteachadh: Mura feumar am modh-obrach a thòiseachadh, is e dì-àitichean a 'chiad cheum. Tha an fhreagairt air a theasachadh gu 94-98 ° C airson 20-30 diogan. Thèid brathan de hydrogen an teamplaid DNA a bhriseadh agus bidh molecolailean DNA singilte air an cruthachadh.
- Annealing: Tha an teòthachd freagairt nas ìsle gu eadar 50 agus 65 ° C agus a chumail airson 20-40 diogan. An t-anneal tùsail airson an teamplaid DNA singilte. Tha an teòthachd air leth cudromach tron cheum seo. Ma tha e ro theth, chan fhaod am primer ceangal. Ma tha e ro fhuar, is dòcha gum bi am primer a 'ceangal gu neo-iomlan. Tha ceangal math air a chruthachadh nuair a bhios an sreath primer dlùth ris an t-sreath teamplaid.
- Leudachadh / Leudachadh: Tha an teòthachd tron cheum seo ag atharrachadh a rèir an seòrsa polymerase. Bidh an DNA polymerase a 'ceangal sruth DNA gu tur ùr.
- Leudachadh deireannach: Thèid an ceum seo a dhèanamh aig 70-74 ° C airson 5-15 mionaidean an dèidh a 'chuairt PCR deireannach.
- Deireannach: Tha an ceum seo roghainneil. Tha an teòthachd air a chumail aig 4-15 ° C agus a 'toirt air falbh an imrich.
Tha an dòigh-obrach air a roinn ann an trì ìrean:
- Meudachadh sònraichte: Anns a h-uile cuairt, tha dàta (am pìos sònraichte de DNA a tha air a riochdachadh) dùblaichte.
- Ìre ìre-a-mach: Mar a bhios an DNA polymerase a 'call gnìomhachd agus a' cleachdadh ath-bheothaichean, bidh an t-ath-bheothachadh a 'slaodadh.
- Plateau: Chan eil barrachd toraidh a 'cruinneachadh.