Tha rianachd DNA cuideachd an crochadh air ar comas cleachdadh electrophoresis gel a bhith a 'sgaradh sreathan de DNA a tha eadar-dhealaichte ann am meud cho beag ri aon paidhir bunait.
Sealladh DNA
Aig deireadh nan 1970an, chaidh dà dhòigh-obrach DNA airson molecolailean DNA nas fhaide a chruthachadh. B 'iad sin modh Sanger (no dideoxy) agus modh Maxam-Gilbert (cleachdaidhean ceimigeach). Tha an dòigh Maxam-Gilbert stèidhichte air sgaradh cudthromach le nucleotide le ceimigean agus tha e air a chleachdadh as fheàrr airson oligonucleotides a rianachadh (polymers goirid nucleotide, mar as trice nas lugha na 50 bonn-paidhir de dh'fhaid). Tha an dòigh Sanger air a chleachdadh gu cumanta oir tha e air a dhearbhadh gu bheil e nas fhasa a bhith a 'cur an gnìomh, agus, le tighinn PCR agus uidheamachadh a' mhodail, tha e furasta a chleachdadh gu sreathan fada de DNA a 'gabhail a-steach ginean gu lèir. Tha am modh seo stèidhichte air crìochnachadh slabhraidh le dideoxynucleotides rè ath-bheothachadh fadachaidh PCR.
Sanger Method
Anns an dòigh Sanger, tha an sreathan DNA a thèid a sgrùdadh air a chleachdadh mar theamplaid agus tha DNA polymerase air a chleachdadh, ann am freagairt PCR, gus sreathan meadhanach a chruthachadh a 'cleachdadh prìomhadairean.
Tha ceathrar mheasgachadh eadar-dhealaichte PCR air an ullachadh, le àireamh sa cheud dhiubh de analogs dideoxynucleoside triphosphate (ddNTP) gu aon de na ceithir nucleotides (ATP, CTP, GTP no TTP). Tha sreath den sreathan DNA ùr a 'leantainn gus an tèid aon de na h-eadar-theangachadh sin a ghabhail a-steach, agus aig an àm sin bidh an sreathan air a bhriseadh ro luath.
Bidh gach freagairt PCR gu bhith a 'toirt a-steach measgachadh de dhiofar fhaid de dhreathan DNA, a' crìochnachadh leis an nucleotide a bha dideoxy air a lipéadú airson an fhreagairt sin. An uair sin, thèid electrophoresis gel a chleachdadh gus sgaradh a dhèanamh air sreathan nan ceithir ath-bheachdan, ann an ceithir slighean eadar-dhealaichte, agus a 'dearbhadh sreath an teamplaid tùsail stèidhichte air dè na h-earrannan de na sreathan a tha a' crìochnachadh le dè na nucleotide.
Anns an fhreagairt Sanger fèin-ghluasadach, thathas a 'cleachdadh prìomhairean a tha air an liostadh le ceithir tagaichean dath flùraiseach. Bidh ath-bhualaidhean PCR, an làthair nan diofar nitsaototides dideoids, air an coileanadh mar a chaidh a mhìneachadh gu h-àrd. Ach, an ath rud, tha na ceithir co-mheasan freagairt an uair sin air an cur còmhla agus air an cur gu aon sreath gel. Tha dathan gach criomag air a lorg le bhith a 'cleachdadh beam laser agus tha coimpiutair a' cruinneachadh an fhiosrachaidh a bhios a 'cruthachadh chròmataig a' sealltainn binneanan airson gach dath, às an urrainnear an teamplaid DNA sreath a dhearbhadh.
Mar as trice, chan eil an dòigh rianachd fèin-ghluasadach ach ceart airson sreathan suas gu suas ri timcheall air 700-800 bun-chàraidean de dh'fhaid. Ach, tha e comasach faighinn sreath iomlan de ghinean nas motha agus, gu dearbh, genomes slàn, a 'cleachdadh modhan ceum-glic leithid rèiteachadh Prìomh Choiseachd agus Shotgun.
Ann an Primer Walking , tha earrann de ghnìomhach de ghine nas motha air a leantainn le bhith a 'cleachdadh modh Sanger. Thathar a 'cruthachadh tùsraichean ùra bho earrann earbsach den t-sreath agus air an cleachdadh gus cumail a' leantainn a 'chuibhreann den ghine a bha taobh a-muigh raon de na h-ath-bheachdan tùsail.
Tha rèiteachadh shotgun a ' toirt a-steach gearradh deamamach air an roinn DNA de dh' ùidh ann am pìosan nas freagarraiche (furasta a stiùireadh), a 'cumail a-mach gach criomag, agus a' rèiteachadh nam pìosan stèidhichte air sreathan thairis. Chaidh am modh seo a dhèanamh nas fhasa le bhith a 'cleachdadh bathar-bog coimpiutaireachd airson na pìosan a tha a' dol thairis.