Thathar a 'cleachdadh a' bhufair seo gus sgrùdadh a dhèanamh air gluasad DNA
Tha neart ìosal ìosal agus buannachdan ìseal aig a 'bhufair seo. Tha e nas freagarraiche do mheudphoresa mòr (> 20 kb) pìosan de DNA agus feumar a chur an àite gu tric no ath-chuairteachadh airson ùine nas fhaide (> 4 h).
Le sin ann an cuimhne, is dòcha gum bi thu airson beachdachadh air grunn bharan den bhufair.
Leis gu bheil am bufair furasta a dhèanamh agus faodar na ceumannan a dhèanamh gu sgiobalta, cha bu chòir dha a bhith a 'dèanamh barrachd air aon bhall aig an aon àm gu sònraichte a' toirt ùine no duilich a tharraing. A 'cleachdadh an stiùireadh gu h-ìosal, bu chòir dha dìreach 30 mionaid a dhèanamh gus am bufair buidhe a dhèanamh. Seo mar a tha:
Ullaich rèiteachadh stoc de EDTA
Thèid fuasgladh EDTA (ethylenediamine tetraacetic acid) a dheasachadh ro thìde. Cha tèid EDTA gu tur a-steach gu fuasgladh gus an tèid am pH atharrachadh gu mu 8.0. Airson fuasgladh stoc 500-mililiter de 0.5 M EDTA, cuir cuideam air 93.05 gram de salann dìosail EDTA (FW = 372.2). Cuir sìos uisge ann an 400-mililiters agus cuiridh e an pH air adhart le sodium hydroxide (NaOH). Dèan suas am fuasgladh gu tomhas deiridh de 500 mililiters.
A 'fuasgladh air fuasgladh stoc bho TAE
Dèan fuasgladh cruaidh (50x) de TAE le bhith a 'toirt a-mach 242 gram de thris base (FW = 121.14) agus a sgaoileadh ann an timcheall air 750 milliliters de uisge le deionized.
Cuir 57.1 mililiters de dh 'acid eigh-shruthach agus 100 mililitir de 0.5 M EDTA (pH 8.0) gu cùramach. Às dèidh sin, atharraich am fuasgladh gu tomhas deireannach de 1 liotair. Faodar am fuasgladh stoc seo a stòradh aig teòthachd an t-seòmair. Chan eil pH a 'bhufair seo air atharrachadh agus bu chòir dha a bhith mu 8.5.
Ullaich Fuasgladh Obrach TAE
Tha am fuasgladh obrach de bufair 1x TAE air a dhèanamh le bhith a 'daingneachadh fuasgladh stoc 50x ann an uisge deionized.
Tha co-chruinneachaidhean sùbailte deireannach 40 mM. Tris-acetate agus 1 mM EDTA. Tha am bufair a-nis deiseil airson a chleachdadh ann a bhith a 'ruith gel agarose.
Na tha a dhìth oirbh airson a 'bhuile
Leis gu bheil am bufair buidhe a-mhàin feumach air seata luath is sìmplidh de stiùiridhean, chan eil an àireamh de stuthan a dh 'fheumar airson a dhèanamh ro mhòr. Bidh feum agad air salann disodium EDTA, ionad Tris, agus searbhag acetic eigheachail.
Feumaidh a bhith a 'dèanamh a' bufair cuideachd meatair pH agus ìrean calibration, mar a bhios iomchaidh. Bidh feum agad cuideachd air beicearan no flasg 600 milliliter agus 1500 mililiters a bharrachd air siolandairean ceum. Mu dheireadh, bidh feum agad air uisge air a ghluasad, a 'gluasad bhàraichean, agus cuiridh tu plèanaichean air falbh.
A 'còmhdach suas
Càite am bi thu a 'dèanamh am bufair - aig làrach sgoile, làrach-obrach, no àite eile, mar do dhachaigh? Thoir sùil air an liosta mus tòisich thu a 'dèanamh cinnteach gu bheil na stuthan gu h-àrd agad airson bufair an TAE.
Mura h-fheàrr leat pàigheadh airson stuthan, thathas a 'moladh an bufair taobh a-muigh do dhachaigh a mholadh. Faodaidh tu na stuthan a dh 'fheumas tu air-loidhne a òrdachadh gu furasta no tadhail air stòr sònraichte dhaibh.